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NRPB01S 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF預裝柱

發布日期:2018-10-27 閱讀次數:300

品  名: 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF

英文名: Recombinant Protein A NUPharose Fast Flow, rProtein A NUPharose FF

目錄號: NRPB01L、NRPB01S(預裝柱)

規  格: 20 ml,100 ml,1 L,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂製

運  輸: 2 ~ 25℃,常壓、避光

貯  存: 20%乙醇,2 ~ 8℃

保質期: 3 年


相關介紹: 

蛋白A是一種金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白質,包含有5個區域,可以同IgG的Fc片段結合。作為一個親和配基,蛋白A能夠比較緊密地偶聯到NUPharose上,使得這些區域可以同遊離的IgG自由結合。一分子的蛋白A可以結合兩分子的IgG。


技術指標:

基質

4%高度交聯瓊脂糖凝膠

配基

重組蛋白A

配基密度

 6 mg/ml

填料粒徑

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推薦流速

20 ~ 100 cm/h

pH穩定性

pH 3 ~ 9

耐反壓

0.3 MPa

載量

≥40 mg/ml IgG


抗體與蛋白A、蛋白G的結合力:

種類

Species

亞型

Antibody Class

蛋白A

Protein A

蛋白G

Protein G

Human

IgG1

IgG2

IgG3

IgG4

IgM

IgD

IgA

Fab

+++

+++

+

+++

+

-

+

+

+++

+++

+++

+++

-

-

-

+

小鼠

Mouse

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG3

IgM

+

+++

+++

+++

-

++

+++

+++

+++

-

大鼠

Rat

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG2c

+

-

-

+++

++

+++

+

+++

Cow

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

山羊

Goat

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

Horse

IgG(ab)

IgG(c)

IgG(T)

+

+

-

-

-

+++

Rabbit

IgG

+++

+++

Pig

IgG

+++

+

Dog

IgG

+++

+

Chicken

IgY

-

-

註:-表示不結合;+表示微弱結合;++表示中等結合;+++表示很強結合。


應用舉例:

結合緩衝液:20 mM磷酸緩衝液,150 mM NaCl,pH 7.4

洗脫緩衝液:0.1 M檸檬酸緩衝液,pH 4.0

中和緩衝液:1 M Tris ~ HCl,pH 9.0

1)1 ml重組蛋白A瓊脂糖凝膠預填柱用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液;

2)用結合緩衝液結合緩衝液平衡 5 ~ 10個柱床體積;

3)將5 ml兔多抗血清用結合緩衝液稀釋到50 ml,0.45 μm濾膜過濾上樣;

4)用結合緩衝液再洗 5 ~ 10個柱床體積;

5)用洗脫緩衝液洗脫抗體,收集洗脫峰,並用中和緩衝液調節其pH至中性;

6)每次使用後用3 ~ 5個柱床體積的0.1 M 檸檬酸緩衝液(pH 3.0)再生清洗;

7)SDS-PAGE(圖1)電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。


圖片44.jpg

圖 1


注意事項:

1)預填柱使用簡易方便,在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。

2)樣品洗脫后一般pH很低,應立即用鹼性中和緩衝液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0)將收集到的抗體溶液中和到中性,或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩衝液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩衝液),以利於維持抗體的生物活性,避免抗體失活。

3)使用時保證柱子和緩衝液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,影響純化效果,如果已經產生氣泡,可以自行重裝柱子。

4)通常(每次)目標樣品洗脫后應繼續用0.1 M檸檬酸緩衝液(pH 2 ~ 3)洗3 ~ 5個柱體積,然後用平衡緩衝液清洗5個柱體積以上,作簡易再生。

5)使用數次后應進行在位清洗,建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3個柱體積(10 ~ 30 min),立即用平衡緩衝液清洗5個柱體積以上;或70%乙醇洗5個柱體積以上(可保持4 ~ 16 h),再用平衡緩衝液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強疏水性蛋白質和脂類,恢復柱子的載量和流速。

6)

推薦流速

預裝柱體積ml

1 ml

5 ml

10 ml

流速(ml/min)

0.2

1

2