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NRPB02S 重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF預裝柱

發布日期:2018-10-27 閱讀次數:259

品  名:重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF

英文名:Recombinant Protein G NUPharose Fast Flow, rProtein G NUPharose FF

目錄號:NRPB02L、NRPB02S(預裝柱)

規  格:20 ml,100 ml,1 L,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂製

運  輸:2 ~ 25℃,常壓、避光

貯  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

保質期:3年


相關介紹:

鏈球菌G蛋白(Streptococcus Protein G 簡稱SPG)是G、C型鏈球菌細胞壁中的一種蛋白質,能特異性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段結合而不影響其Fab段與抗原分子結合的能力,其親和填料可以用於從血清、腹水、組織培養物等上清中結合吸附並純化免疫球蛋白(抗體)。


技術指標:

基質

4%高度交聯瓊脂糖凝膠

配基

重組蛋白G

配基密度

≥6 mg/ml

填料粒徑

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推薦流速

20 ~ 100 cm/h

工作(清洗)pH

2 ~ 9(2 ~ 10)

耐反壓

0.3 MPa

載量

≥40 mg/ml IgG


抗體與蛋白A、蛋白G的結合力:

種類

Species

亞型

Antibody Class

蛋白A

Protein A

蛋白G

Protein G

Human

IgG1

IgG2

IgG3

IgG4

IgM

IgD

IgA

Fab

+++

+++

+

+++

+

-

+

+

+++

+++

+++

+++

-

-

-

+

小鼠

Mouse

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG3

IgM

+

+++

+++

+++

-

++

+++

+++

+++

-

大鼠

Rat

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG2c

+

-

-

+++

++

+++

+

+++

Cow

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

山羊

Goat

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

Horse

IgG(ab)

IgG(c)

IgG(T)

+

+

-

-

-

+++

Rabbit

IgG

+++

+++

Pig

IgG

+++

+

Dog

IgG

+++

+

Chicken

IgY

-

-


註:-表示不結合;+表示微弱結合;++表示中等結合;+++表示很強結合。


應用舉例:

結合緩衝液:20 mM磷酸鹽緩衝液(PB),pH 7.4

洗脫緩衝液:0.1 M甘氨酸-鹽酸緩衝液,pH 2.7

中和緩衝液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

1)1 ml重組蛋白G瓊脂糖凝膠預填柱,用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液;

2)用結合緩衝液平衡 5 ~ 10個柱床體積;

3)將5 ml兔多抗血清用結合緩衝液稀釋至50 ml,0.45 μm濾膜過濾上樣;

4)用結合緩衝液平衡 5 ~ 10個柱床體積至基線;

5)用洗脫緩衝液洗脫抗體,收集洗脫峰,並用中和緩衝液調節其pH至中性;

6)每次使用后再用3 ~ 5個柱床體積的洗脫緩衝液再生清洗;

7)SDS-PAGE(圖1)電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。


圖片29.jpg圖片30.jpg

圖 1


注意事項:

1)預填柱使用簡易方便,在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。

2)樣品洗脫后一般pH很低,應立即用鹼性中和緩衝液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0) 將收集到的抗體溶液中和到中性,或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩衝液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩衝液),以利於維持抗體的生物活性,避免抗體失活。

3)使用時保證柱子和緩衝液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,影響純化效果,如果已經產生氣泡,可以自行重裝柱子。

4)通常目標樣品洗脫后應繼續用0.1 M甘氨酸-鹽酸緩衝液(pH 2.0 ~ 2.7)洗3 ~ 5個柱體積,然後用平衡緩衝液清洗5個柱體積以上,作簡易再生。

5)使用數次后應進行在位清洗,建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3個柱體積(10 ~ 30 min),立即用平衡緩衝液清洗5個柱體積以上;或70%乙醇洗5個柱體積以上(可保持4 ~ 6 h),再用平衡緩衝液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強疏水性蛋白質和脂類,恢復柱子的載量和流速。

6)

推薦流速

預裝柱體積ml

1 ml

5 ml

10 ml

流速(ml /min )

0.2

1

2