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NRPB03S 重組人源血管內皮生長因子親和瓊脂糖凝膠預裝柱

發布日期:2018-10-27 閱讀次數:229

品  名: 重組人源血管內皮生長因子親和瓊脂糖凝膠

英文名: Recombinant Human VEGF NUPharose, rh-VEGF NUPharose

目錄號: NRPB03L、NRPB03S(預裝柱)

規  格: 20 ml,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂製

運  輸: 2 ~ 25℃,常壓、避光

貯  存: 20%乙醇,2 ~ 8℃

保質期: 5年


相關介紹: 

血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)又稱血管通透因子(Vascular permeability factor,VPF),是胎兒和成人血管發生和血管生成過程中重要的調控因子,在增強血管的滲透性、誘導血管發生和血管生成及內皮細胞生長、促進細胞遷移、抑制細胞凋亡等方面發揮作用。


VEGF的表達水平和腫瘤內的血管生長情況呈正相關,並且和腫瘤的轉移風險呈正相關,抑制VEGF信號轉導可以抑制多種腫瘤的發生和發展。將rh-VEGF165偶聯到瓊脂凝膠填料製備成的rh-VEGF165親和瓊脂糖凝膠填料預裝柱可用於篩選能夠同VEGF165相互作用的化合物。


技術指標:

基質

6%高度偶聯的瓊脂糖凝膠

配基

rh-VEGF165

配基密度

0.25~1.0 mg/ml

填料粒徑

45~165 μm

最大流速

750 cm/h

推薦流速

100 cm/h

工作(清洗)pH

3~93~10

0.3 MPa

保存條件

+2~8保存於20%乙醇溶液中


應用舉例:捕捉與VEGF165相互作用的分子

結合緩衝液:20 mM磷酸緩衝液,150 mM NaCl,pH 7.4

洗脫緩衝液I:0.1M檸檬酸緩衝液,pH 6.0

洗脫緩衝液II:0.1M甘氨酸緩衝液,pH 2.7

中和緩衝液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

以上緩衝液需要用戶自己準備!

1)5 ml rh-VEGF165親和瓊脂糖凝膠預裝柱用5~10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液;

2)用結合緩衝液平衡 5~10個柱床體積;

3)3~5 ml 目的樣品經0.45 μm濾膜過濾后載入上柱;

4)用結合緩衝液沖洗 5~10個柱床體積;

5)用洗脫緩衝液I和洗脫緩衝液II先後洗脫10個柱床體積;

6)自2/3柱床體積處開始收集1個柱床體積的洗脫液,並用中和緩衝液調節其pH至中性;

7)TLC雙向擴散層析(圖1)分析捕捉到的與VEGF165相互作用的分子。

圖片37.jpg

圖1、rh-VEGF165親和瓊脂糖凝膠捕捉同VEGF165相互作用的分子的TLC雙向擴散層析

(茚三酮染色)


注意事項:

1)預填柱使用簡易方便,在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務;

2)樣品洗脫后一般pH很低,應立刻用鹼性中和緩衝液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0)將收集到的洗脫液中和到中性,或在收集容器中事先裝5%~10%、pH 9.0的緩衝液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩衝液),以利於維持目標分子的生物活性,避免目標分子失活;

3)使用時保證柱子和緩衝液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,如果已經產生氣泡,可以自行重裝柱子;

4)通常使用后應用4個柱床體積的0.1 M甘氨酸- HCl(pH 2.7)做再生處理,然而長期採用極端的洗脫條件將縮短親和介質的使用壽命,每使用5次再生1次即可。

5)本產品使用10次后最好先用20%乙醇洗5個柱床體積,然後再用70%乙醇洗脫5~10個柱床體積,可洗脫脂類和疏水性較強的蛋白質,恢復柱子的載量和流速。