手机版 | wap站点 | 主页 | 网站首页

NRPB04S 重組人鹼性成纖維細胞生長因子親和瓊脂糖凝膠預裝柱

發布日期:2018-10-27 閱讀次數:235

品  名:重組人鹼性成纖維細胞生長因子親和瓊脂糖凝膠

英文名:Recombinant Human bFGF NUPharose,rh-bFGF NUPharose

目錄號:NRPB04L、NRPB04S(預裝柱)

規  格:20 ml,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂製

運  輸:2 ~ 25℃,常壓、避光

貯  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

保質期:5年


相關介紹: 

鹼性成纖維細胞生長因子(Fibroblast Growth Factor-basic,bFGF)又稱FGF-2,能夠與肝素相結合,屬於FGF超家族的一員,在胚胎形成、組織再生、傷口癒合、中樞神經系統發育、血管生成和腫瘤發展等過程中發揮重要的作用。


很多中藥在臨床上被證明具有治療癌症的功效,但其有效成分不明。將rh-bFGF偶聯到瓊脂凝膠填料製備成的rh-bFGF親和瓊脂糖凝膠填料預裝柱可用於從中藥中篩選能夠同bFGF相互作用的藥物分子,為中藥抗癌有效成分的鑒定提供有效、快速的方法。


技術指標:

基質

6%高度偶聯的瓊脂糖凝膠

配基

rh-bFGF

配基密度

0.25~1.0 mg/ml

填料粒徑

45~165 μm

最大流速

750 cm/h

推薦流速

100 cm/h

工作(清洗)pH

3~93~10

0.3 MPa

保存條件

+2~8保存於20%乙醇溶液中


應用舉例:捕捉與bFGF相互作用的分子

1)1 ml rh-bFGF親和瓊脂糖凝膠預裝柱用20 mM PBS(pH7.4)平衡5~10個柱床體積;

2)10 ml 三葉青飲片泡製液經0.45 μm濾膜過濾后載入上柱;

3)用20 mM PBS(pH7.4)平衡 5個柱床體積;

4)用100 mM甘氨酸-HCl(pH2.7)洗脫4個柱床體積;

5)自2/3柱床體積處開始收集1個柱床體積的洗脫液,並用中和緩衝液調節其pH至中性;

6)用HSA親和柱從三葉青飲片泡製液中分離與HSA結合的活性成分作為對照;

7)HPLC檢測分析(圖1)捕捉到的與bFGF相互作用的分子。

圖片38.jpg

圖1、rh-bFGF親和瓊脂糖凝膠捕捉同bFGF相互作用分子的HPLC檢測


注意事項:

1)預填柱使用簡易方便,在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務;

2)樣品洗脫后一般pH很低,應立刻用鹼性中和緩衝液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0)將收集到的洗脫液中和到中性,或在收集容器中事先裝5%~10%、pH 9.0的緩衝液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩衝液),以利於維持目標分子的生物活性,避免目標分子失活;

3)使用時保證柱子和緩衝液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,如果已經產生氣泡,可以自行重裝柱子;

4)通常使用后應用4個柱床體積的0.1 M甘氨酸- HCl(pH 2.7)做再生處理,然而長期採用極端的洗脫條件將縮短親和介質的使用壽命,每使用5次再生1次即可。

5)本產品使用10次后最好先用20%乙醇洗5個柱床體積,然後再用70%乙醇洗脫5~10個柱床體積,可洗脫脂類和疏水性較強的蛋白質,恢復柱子的載量和流速。