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NRPB06S 重耐鹼蛋白A瓊脂糖凝膠FF預裝柱

發布日期:2018-10-27 閱讀次數:196

品  名:耐鹼蛋白A瓊脂糖凝膠FF

英文名:Alkali-tolerant Protein A NUPharose Fast Flow , rat-PA NUPharose FF

目錄號:NRPB06L、NRPB06S(預裝柱)

規  格:20 ml,100 ml,1 L,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂製

運  輸:2 ~ 25℃,常壓、避光

貯  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

保質期:3年


相關介紹: 

耐鹼蛋白A瓊脂糖凝膠FF與普通的蛋白A瓊脂糖凝膠相比,主要提高了凝膠的耐鹼性,可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除熱源。在骨架與重組耐鹼蛋白A鍵合上分別設計了延伸碳臂和定向結合位點,保證了重組耐鹼蛋白A與骨架的定向牢固鍵合,以及與抗體的高效親和。


技術指標:

基質

4%高度交聯瓊脂糖凝膠

配基

重組耐鹼蛋白A

配基密度

≥6 mg/ml

填料粒徑

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推薦流速

20 ~ 100 cm/h

工作(清洗)pH

3 ~ 11(2 ~ 13)

耐反壓

0.3 MPa

載量

≥40 mg/ml IgG


產品特點:

1)配基脫落:約1~7 ng rat-PA/mg IgG,配套的rat-PA試劑盒(NRPB53S)檢測多次使用的洗脫液中殘留rat-PA含量

2)耐鹼性

在25℃的條件下,將rat-PA浸在不同濃度的NaOH溶液中:

0.1 M 處理72 h載量維持在90%以上;

0.5 M處理16 h在80%以上,處理36 h在50%以上;

1.0 M處理4 h在90%以上,處理8 h在50%以上。

圖片39.jpg


3)耐酸性

在25℃的條件下,將rat-PA浸在不同pH的酸溶液中:

pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 處理6天載量均維持在90%以上

0.5 M HCl處理2天載量在80%以上,處理6天在50%以上 


圖片40.jpg


4)耐壓性

儀器:AKTA explorer 100

柱子:1.0 cm×30 cm

流速:每30 s增加0.5 ml/min

圖片41.jpg

5)使用壽命

200次循環純化牛血清中IgG,每次使用0.1 M NaOH處理15 min,200次使用后未發現明顯的載量損失。

圖片1.png


應用舉例:

結合緩衝液:20 mM磷酸緩衝液,150 mM NaCl,pH 7.4

洗脫緩衝液:0.1 M檸檬酸緩衝液,pH 4.0

中和緩衝液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

1)1 ml耐鹼蛋白A瓊脂糖凝膠FF預填柱用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液;

2)用結合緩衝液結合緩衝液平衡 5 ~ 10個柱床體積;

3)將5 ml兔多抗血清用結合緩衝液稀釋到50 ml,0.45 μm濾膜過濾上樣;

4)用結合緩衝液再洗 5 ~ 10個柱床體積;

5)用洗脫緩衝液洗脫抗體,收集洗脫峰,並用中和緩衝液調節其pH至中性;

6)每次使用後用3 ~ 5個柱床體積的0.1 M NaOH溶液再生清洗;

7)SDS-PAGE(圖1)電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。

圖片2.png


圖 1


注意事項:

1)預填柱使用簡易方便,在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務。

2)樣品洗脫后一般pH很低,應立即用鹼性中和緩衝液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0) 將收集到的抗體溶液中和到中性,或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩衝液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩衝液),以利於維持抗體的生物活性,避免抗體失活。

3)使用時保證柱子和緩衝液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,如果已經產生氣泡,可以自行重裝柱子。

4)使用后應進行在位清洗,一般建議用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3個柱體積(10 ~ 30 min),立即用平衡緩衝液清洗5個柱體積以上。

5)更高要求(消毒、去內毒素、超牢固蛋白殘留等)的在位清洗,可以先用含還原劑(如100 mM DTT、β-ME或1-巰基甘油)的平衡緩衝液清洗3 ~ 5個柱體積,再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5個柱體積(10 ~ 30 min),然後用無菌無內毒素的平衡緩衝液清洗5個柱體積以上。

6)雖然本產品具有較好的鹼耐受性,但長期使用較高的NaOH濃度(如0.5 mol/L)清洗仍會縮短使用壽命,建議每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次,每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次。

7)為了更好的保護填料,應避免強烈的pH變化,建議酸性洗脫目的抗體后,用平衡緩衝液恢復至中性,再進行NaOH清洗。

8)本產品具有極低的配基脫落率(<10 ng/mg IgG),結合耐鹼特性,特別適用於單克隆抗體的生產。但實驗發現長期儲存后首次使用配基脫落率會比較高,建議長期儲存后的首次使用,先用酸性洗脫液清洗3 ~ 5個柱體積,再用平衡緩衝液平衡和樣品純化。

推薦流速

預裝柱體積 1 ml 5 ml 10 ml

流速(ml /min ) 0.2 1 2

9)


推薦流速

預裝柱體積

1 ml

5 ml

10 ml

流速(ml /min )

0.2

1

2