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NRPB08S GST-瓊脂糖凝膠FF預裝柱

發布日期:2018-10-27 閱讀次數:207

品  名:GST-瓊脂糖凝膠FF

英文名:Glutathione NUPharose Fast Flow, GST NUPharose FF

目錄號:NRPB08L、NRPB08S(預裝柱)

規  格:20 ml,100 ml,1 L,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂製

運  輸:2 ~ 30℃,常壓、避光

貯  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

保質期:3年


相關介紹:

GST-瓊脂糖凝膠FF是一種將谷胱甘肽鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質。該產品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網架結構,與生物活性大分子有很好的相容性,具有載量高,非特異性吸附少,流速快等特點,主要用於谷胱甘肽轉移酶標記蛋白(GST融合蛋白)、谷胱甘肽轉移酶和谷胱甘肽依賴蛋白的分離純化。


技術指標:

基質

4%高度交聯瓊脂糖凝膠

配基

谷胱甘肽

配基密度

≥10 μmol/ml

填料粒徑

60 ~ 180 μm

蛋白質載量

10mg谷胱甘肽-S-轉移酶/mL

最大流速

300 cm/h

推薦流速

20 ~ 100 cm/h

耐反壓

0.3 MPa

pH穩定性

3 ~ 12(長時間);3 ~ 13(短時間)

化學穩定性

在以下溶液中穩定:常用的水相緩衝液;1 M乙酸(pH 4.0);6 M鹽酸胍;70% 乙醇。


使用方法:

  1. 裝柱

  1.1 根據分離目標性質配製初始緩衝液(平衡液)和洗脫緩衝液。

  1.2 將凝膠抽干,並用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇,用蒸餾水配成勻漿並脫氣。

  1.3 將層析柱垂直固定,底端用水或緩衝液潤濕並保持一段液位。

  1.4 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,使凝膠在柱內自由沉降。

  1.5 連結好柱子頂端活動柱頭,打開蠕動泵,讓緩衝液用使用時操作流速流過5柱體積,再使用1.5倍的操作流速流過5柱體積,調節適配柱頭,使其盡量貼近膠面,最後用2 ~ 3倍柱體積的緩衝液平衡柱子。


注意:

1)所有操作過程不能引入氣泡,保證裝膠的均勻度。

2)如無條件做1.2,填料層有氣泡,可進行2次裝柱,去除保存的乙醇和氣泡。

3)乙醇等試劑配製的溶液需要脫氣。

  2. 平衡

  將平衡緩衝液以操作流速平衡層析柱,觀察檢測器的變化,直到電導、pH等參數不變。推薦的結合平衡緩衝液為:10 mM PBS (140 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, pH 7.4)。

  3. 上樣

  切換轉換閥進行上樣,上樣量根據樣品的性質和層析介質的量進行選擇,也可進行線性實驗找到最佳上樣量;樣品的預處理:置換緩衝液,澄清過濾(0.45、0.22 μm)等。

  4. 沖洗

  用2 ~ 3個柱體積的平衡緩衝液沖洗上樣后的層析柱,觀察檢測器的變化,直到電導、pH等參數不變,此時未交換的組分被清洗出去。

  5. 洗脫

  一般推薦用10 mM還原型谷胱甘肽溶液(可含緩衝成分)進行洗脫。推薦的洗脫緩衝液為:50 mM Tris-HCl, 10 mM 還原型谷胱甘肽(GSH), pH 8.0。

  6. 再生

  用蒸餾水按操作流速沖洗3 ~ 5個柱體積,接著用平衡液洗到平衡3 ~ 5個柱體積。

  若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

  7. 在位清洗(CIP)

去除沉澱和變性蛋白:用2 CV 6 M鹽酸胍清洗,立即用10 mM PBS(pH 7.4)洗5 CV。

去除強疏水蛋白:用3 ~ 4 CV 70%乙醇清洗,立即用10 mM PBS(pH 7.4)洗5 CV。


注意事項:

推薦流速

預裝柱體積ml

1 ml

5 ml

10 ml

流速(ml /min )

0.2

1

2