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NRPB10S STI-瓊脂糖凝膠FF預裝柱

發布日期:2018-10-27 閱讀次數:203

品  名:STI-瓊脂糖凝膠FF

英文名:Soybean Trypsin Inhibitor NUPharose Fast Flow, STI NUPharose FF

目錄號:NRPB010L、NRPB10S(預裝柱)

規  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格訂製

運  輸:2 ~ 30℃,常壓、避光

貯  存:20%乙醇,2 ~ 25℃

保質期:3年


相關介紹: 

STI-瓊脂糖凝膠FF是一種將大豆胰蛋白酶抑製劑(STI)鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質。該產品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網架結構,與生物活性大分子有很好的相容性,具有載量高,非特異性吸附少,流速快等特點,主要用於胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血X因子等絲氨酸蛋白酶的提取和純化,也可以用於腸激酶的去除。


技術指標:

基質

4%瓊脂糖凝膠微球

配基

STI

配基密度

~ 6 mg/ml

填料粒徑

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推薦流速

20 ~ 100 cm/h

pH穩定性

pH 3 ~ 9

耐反壓

0.3 MPa

載量

≥30 mg/ml胰蛋白酶

保存條件

2 ~ 8℃保存於20%乙醇溶液中


使用方法:

  1. 裝柱

  1.1 根據分離目標性質配製初始緩衝液(平衡液)和洗脫緩衝液。

  1.2 將凝膠抽干,並用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇,用蒸餾水配成勻漿並脫氣。

  1.3 將層析柱垂直固定,底端用水或緩衝液潤濕並保持一段液位。

  1.4 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,使凝膠在柱內自由沉降。

  1.5 連結好柱子頂端活動柱頭,打開蠕動泵,讓緩衝液用使用時操作流速流過5柱體積,再使用1.5倍的操作流速流過5個柱體積,調節適配柱頭,使其盡量貼近膠面,最後用2 ~ 3倍柱體積的緩衝液平衡柱子。


注意:

1)所有操作過程不能引入氣泡,保證裝膠的均勻度。

2)如無條件做1.2,填料層有氣泡,可進行2次裝柱,去除保存的乙醇和氣泡。

3)乙醇等試劑配製的溶液需要脫氣。

  2. 平衡

  將平衡緩衝液以操作流速平衡層析柱,觀察檢測器的變化,直到UV、pH等參數不變。推薦的平衡緩衝液為:50 mM Tris-HCl,500 mM NaCl,pH 8.0。

  3. 上樣

  切換轉換閥進行上樣,上樣量根據樣品的性質和層析介質的量進行選擇,也可進行線性實驗找到最佳上樣量;樣品的預處理:置換緩衝液,澄清過濾(0.45、0.22 μm)等。

  4. 沖洗

  用2 ~ 3個柱體積的平衡緩衝液沖洗上樣后的層析柱,觀察檢測器的變化,直到UV、pH等參數不變。

  5. 洗脫

  一般用酸性緩衝液進行洗脫。推薦的洗脫緩衝液為:100 mM Glycine-HCl,500 mM NaCl,pH 3.0。洗脫后的樣品應儘快調節至中性,比如加入1/10體積的2 M Tris-HCl (pH 8.0)。

  6. 清洗

  可以用平衡緩衝液和洗脫緩衝液反覆清洗,本填料的活性基團為蛋白質,不能耐受強酸、強鹼、強有機溶劑的清洗。