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NRPB13S 蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF預裝柱

發布日期:2018-10-27 閱讀次數:257

品  名:蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF

英文名:Protein A/G NUPharose Fast Flow, Protein AG NUPharose FF

目錄號:NRPB13L、NRPB13S(預裝柱)

規  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml預裝柱,5 ml預裝柱,特殊規格定製

運  輸:2 ~ 25℃,常壓、避光

貯  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

保質期:3年


相關介紹: 

蛋白A蛋白G瓊脂糖凝膠FF是將重組蛋白A蛋白G融合蛋白(r-PAG,NRPA14S)鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的親和分離介質。與單獨的蛋白A或蛋白G分離介質相比,具有更寬廣的結合範圍,可以與人的所有IgG亞型、IgA、IgE、IgM結合,但不能與小鼠的IgA、IgM和血清白蛋白結合,適合用於鼠IgG單抗的提取和檢測。同時融合后的r-PAG降低對pH的依賴,允許在pH5 ~ 8進行結合。


技術指標:

基質

4%交聯瓊脂糖凝膠微球

配基

蛋白A蛋白G融合蛋白

配基密度

≥6 mg/ml

填料粒徑

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推薦流速

20 ~ 100 cm/h

pH穩定性

pH 3 ~ 9pH2 ~ 10(清洗)

耐反壓

0.3 MPa

載量

 20 mg/ml IgG

保存條件

2 ~ 8℃保存於20%乙醇溶液中


應用舉例:

結合緩衝液:20 mM磷酸緩衝液,150 mM NaCl,pH 7.4

洗脫緩衝液:0.1 M Glycine-HCl緩衝液,pH 2.5

中和緩衝液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

1)1 ml蛋白A蛋白G瓊脂糖凝膠FF預填柱用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液;

2)用結合緩衝液結合緩衝液平衡 5 ~ 10個柱床體積;

3)將3 ml兔多抗血清用結合緩衝液稀釋到15 ml,0.45 μm濾膜過濾上樣;

4)用結合緩衝液再洗 5 ~ 10個柱床體積;

5)用洗脫緩衝液洗脫抗體,收集洗脫峰,並用中和緩衝液調節其pH至中性;

6)目的抗體洗脫後用結合緩衝液清洗5 ~ 10個柱體積平衡柱子;

7)分析洗脫下來的兔多抗。

種類

Species

亞型

Antibody Class

蛋白A

Protein A

蛋白G

Protein G

蛋白A蛋白G融合蛋白

Protein AG

 

 

 

Human

IgG1

IgG2

IgG3

IgG4

IgM

IgD

IgA

Fab

+++

+++

+

+++

+

-

+

+

+++

+++

+++

+++

-

-

-

+

+++

+++

+++

+++

+

-

+

+

 

小鼠

Mouse

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG3

IgM

+

+++

+++

+++

-

++

+++

+++

+++

-

++

+++

+++

+++

-

 

大鼠

Rat

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG2c

+

-

-

+++

++

+++

+

+++

++

+++

+

+++

Cow

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

+++

+++

山羊

Goat

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

+++

+++

Horse

IgG(ab)

IgG(c)

IgG(T)

+

+

-

-

-

+++

+

+

+++

Rabbit

IgG

+++

+++

+++

Pig

IgG

+++

+

+++

Dog

IgG

+++

+

+++

Chicken

IgY

-

-

-

註:-表示不結合;+表示微弱結合;++表示中等結合;+++表示很強結合。


注意事項:

1)預填柱使用簡易方便,在沒有儀器設備的條件下也可以完成純化任務;

2)樣品洗脫后一般pH很低,應立刻用鹼性中和緩衝液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0)將收集到的抗體溶液中和到中性,或在收集容器中事先裝5% ~ 10%、pH 7.5的緩衝液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩衝液),以利於維持抗體的生物活性,避免抗體失活;

3)使用時保證柱子和緩衝液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,如果已經產生氣泡,可以自行重裝柱子;

4)多次使用後會有沉澱蛋白,強疏水性蛋白,脂蛋白,脂質體等非特異吸附凝膠上,可以用0.1 %去垢劑短時間清洗,如0.1% Triton X-100清洗2個柱體積,立即用結合緩衝液洗5 ~ 10個柱體積。也可以用70%乙醇清洗作同樣清洗。

5)

推薦流速

預裝柱體積ml

1 ml

5 ml

10 ml

流速(ml /min )

0.2

1

2